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病理檢測(cè)

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特殊染色
ROS染色
周期:.
規(guī)格:片
貨號(hào):PR-004177
單位:.
價(jià)格:詢(xún)價(jià)
品牌:行一生物

? 服務(wù)介紹

ROS染色原理是利用熒光探針(如Dihydroethidium,DHE)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的水平。ROS主要包括超氧陰離子自由基、過(guò)氧化氫、羥自由基等。這些活性氧分子在細(xì)胞內(nèi)參與多種生理和病理過(guò)程。在病理?xiàng)l件下,由于活性氧的產(chǎn)生和清除失去了正常平衡,會(huì)對(duì)組織細(xì)胞造成損傷。二氫乙錠(Dihydroethidium,DHE),可自由透過(guò)活細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化,形成氧化乙錠;氧化乙錠可摻入染色體DNA中,產(chǎn)生紅色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中紅色熒光的產(chǎn)生,可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。檢測(cè)ROS水平常用于凋亡、衰老、自噬、炎癥、缺血再灌注損傷、神經(jīng)退行疾病等領(lǐng)域的研究。ROS染色是活氧檢測(cè),組織冰凍切片不能用固定液固定,最好是新鮮組織,ROS陰性細(xì)胞僅有較低的熒光強(qiáng)度,ROS陽(yáng)性細(xì)胞有較強(qiáng)的紅色熒光。


? 實(shí)驗(yàn)器材及主要實(shí)驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)器材

主要實(shí)驗(yàn)試劑

? 實(shí)驗(yàn)步驟

1.冰凍切片固定:切片于4%多聚甲醛固定5min,蒸餾水洗1min;PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
2.冰凍切片稍甩干后用組化筆在組織周?chē)?strong>畫(huà)圈(防止抗體流走),在圈內(nèi)滴加ROS染液(取1mgDihydroethidium于3.1mLDMSO中,得到1mMDihydroethidium),避光恒溫箱37℃孵育30min。
3.DAPI復(fù)染細(xì)胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
4.封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
5.鏡檢拍照:切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm,發(fā)射波長(zhǎng)420nm;FITC綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm,發(fā)射波長(zhǎng)515-555nm;CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560,發(fā)射波長(zhǎng)590nm)。

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